快速細(xì)胞分析儀應(yīng)用簡介

發(fā)布時間： 2010/7/6　　點擊次數(shù)： 1703次

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詳細(xì)介紹：

細(xì)胞計數(shù)一直是令大家頭疼的事，傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)不但麻煩，而且還沒有辦法判斷細(xì)胞的活率、細(xì)胞的體積、細(xì)胞的的直徑、細(xì)胞的濃度、以及細(xì)胞碎片等諸多問題。

傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)方法就是一臺細(xì)胞計數(shù)器（hemacytometer）和一部顯微鏡，為了得到準(zhǔn)確的計數(shù)，血細(xì)胞計數(shù)器必須首先用擦鏡紙*的進行清潔，然后用將要進行計數(shù)的細(xì)胞填滿血細(xì)胞計數(shù)器，過程必須十分小心，這樣才能保證細(xì)胞稀釋的合適濃度和細(xì)胞沒有聚集的現(xiàn)象，接著你得用顯微鏡按照血細(xì)胞計數(shù)器上的小柵格進行計數(shù)，為了準(zhǔn)確起見，你不停的計數(shù)直到你數(shù)了至少100個細(xì)胞為止。

目前使用比較常用的方法是：首先取來樣品細(xì)胞用臺盼藍染色，然后通過CDC成像，細(xì)胞在CDC成像后通過軟件來計算細(xì)胞的個數(shù)和細(xì)胞的活率，但是這種做法卻存在一下缺點：

一是臺盼藍對細(xì)胞有毒害作用，對部分已損傷的細(xì)胞會致死，活性測量的結(jié)果會有所偏差；

二是對于細(xì)胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數(shù)。

三是檢測結(jié)果重復(fù)性差

我現(xiàn)在給大家介紹一種新的方法：

把樣品細(xì)胞懸浮在（一種等電壓的電解質(zhì)溶液）中，在通過一根毛細(xì)管測量通道時，被頻率為1MHz的電脈沖掃描檢測細(xì)胞，由于死細(xì)胞的膜是破裂不完整的，胞內(nèi)的細(xì)胞質(zhì)同膜外的等滲透緩沖液有相同的電導(dǎo)率，因此電脈沖信號能夠穿過膜直接檢測到細(xì)胞核的大小，而活細(xì)胞擁有完整的細(xì)胞膜，電脈沖信號無法透過，測到的是全細(xì)胞的體積，每個細(xì)胞或團塊經(jīng)過測量孔時都會產(chǎn)生一個信號，信號次數(shù)就是細(xì)胞的數(shù)目，信號的大小也與細(xì)胞的大小呈一定比例，利用兩者體積上的差異，就能夠區(qū)分死活細(xì)胞

功能：細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞死活判斷、細(xì)胞體積檢測、細(xì)胞團校正.

包括: 細(xì)胞碎片數(shù) 細(xì)胞活率細(xì)胞團校正系數(shù)

活細(xì)胞數(shù) / 活細(xì)胞濃度

死細(xì)胞數(shù) / 死細(xì)胞濃度

總細(xì)胞數(shù) / 總細(xì)胞濃度

細(xì)胞直徑 / 平均直徑

細(xì)胞總體積 / 平均體積/典型體積

適用范圍：

包括所有的哺乳動物細(xì)胞（包括腫瘤細(xì)胞, 血細(xì)胞, 原代培養(yǎng)細(xì)胞及各種細(xì)胞系），藻類，細(xì)菌，精子細(xì)胞，寄生蟲，浮游生物等.

應(yīng)用領(lǐng)域：

藥理毒理分析 / 腫瘤研究 / 混合細(xì)胞（干細(xì)胞）樣本分析；

組織工程 / 發(fā)酵監(jiān)控 / 病毒感染復(fù)數(shù)（MOI）分析 / 細(xì)胞質(zhì)量控制；

細(xì)胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化 / 環(huán)境毒理與檢測 / 海洋生物和藻類研究

細(xì)菌及顆粒的計數(shù) / 細(xì)胞結(jié)團情況評估等

胞膜完整性區(qū)分法

這與傳統(tǒng)的臺盼藍染色法有著很大程度的不同。傳統(tǒng)的臺盼藍染色有三大缺點和不足：

一是臺盼藍對細(xì)胞有毒害作用，對部分已損傷的細(xì)胞會致死，活性測量的結(jié)果會有所偏差；

二是對于細(xì)胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數(shù)。

三是檢測結(jié)果重復(fù)性差。

胞膜完整性技術(shù)無須使用染色，而是利用細(xì)胞膜的完整性來測定。死細(xì)胞具有一個可滲透的細(xì)胞膜，它允許等滲緩溶液CASYt-on進入。因此，死細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞質(zhì)同胞外的等滲緩沖液具有相同的電導(dǎo)率，可以被電極所忽略，所測得的僅僅是緊密結(jié)構(gòu)的細(xì)胞核的體積。而活細(xì)胞擁有完整的細(xì)胞膜，胞膜完整性技術(shù)分析的是全細(xì)胞的體積。利用兩者的相對差異即可區(qū)分開來。

電子脈沖分析技術(shù)

它和傳統(tǒng)的CCD成像技術(shù)有很大的不同。CCD成像技術(shù)質(zhì)量不高，而且是從靜態(tài)獲取信息，因此有偏差。而電子脈沖分析技術(shù)使用的是動態(tài)的電子脈沖分析技術(shù)從來獲取信息。當(dāng)懸浮于電解質(zhì)溶液中的細(xì)胞通過一個的測量孔抽提時，在這片低壓區(qū)域中被每秒1百萬次頻率的電子脈沖掃描，同時可對每個細(xì)胞作大小，重量厚度及時間的分析。這些信號將在一個有512000個通道的多孔徑分析器中分離和積累，zui后*的結(jié)果由芯片計算技術(shù)即時性的完成

進步與優(yōu)勢：

1．電子背景信號通過電子脈沖分析域而被過濾。因此，它是在無背景條件下工作的，即使細(xì)胞含量小于100個/ml也能被準(zhǔn)確的測量。

2．即使在高活性區(qū)間80%--100%也能進行*的辨認(rèn)，而不會出現(xiàn)錯誤的陽性結(jié)果。

3．絕大多數(shù)染色法都會傷害細(xì)胞，引起結(jié)果的偏差。*的方法可免除這種結(jié)果，得到真實的細(xì)胞情況。

4．不必?fù)?dān)心樣品的濃度過高而影響測量。當(dāng)高濃度超過允許的極限值時，系統(tǒng)會發(fā)出警告信息，通過調(diào)整測量的毛細(xì)管而改變極限值，然后通過稀釋調(diào)節(jié)濃度而測量。

5．對于棘手的細(xì)胞團問題，通過一個細(xì)胞團校正器，它的無限制測量范圍，能在多點測量尺度耦合，使得小細(xì)胞團和大細(xì)胞團體積都可以測得

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